Análise de PCR: o que é isso? Como fazer o teste de PCR corretamente

Não há muito tempo, uma confiança,um método altamente sensível e rápido para diagnosticar várias doenças infecciosas de uma pessoa. Este método é chamado de "análise de PCR". O que é, qual será a sua essência, o que os microorganismos podem revelar e como devolvê-lo adequadamente, nós diremos no nosso artigo.

História da descoberta

Inventou o método da reação em cadeia da polimerase (PCR)Cientista americano Cary Myullis em 1983. Inicialmente patenteou o método de diagnóstico pela empresa "Cetus Corporation", em que seu criador trabalhou. Mas em 1992, todos os direitos e patentes foram vendidos para a empresa "Hoffman-La Roche". Depois disso, pareceu que estudos paralelos semelhantes foram realizados e foram registrados por outros biólogos americanos, como Alice Chen, David Edgar, John Treel. Em 1980, os cientistas soviéticos A. Slyusarenko, A. Kaledin e S. Gorodetsky trataram desse problema. Portanto, era impossível determinar o único titular do direito. Muitos bioquímicos destacados contribuíram para o desenvolvimento do método da reação em cadeia da polimerase e patentearam suas inovações. No momento, a análise de PCR é realizada em todos os lugares em laboratórios especialmente equipados.

A essência do método de diagnóstico por PCR

Análise de PCR: o que é e como funciona? A essência do método é aumentar em um meio microbiano específico por meio de uma enzima especial de DNA polimerase em condições artificiais. Para fazer isso, multiplique o DNA-material existente. Assim, na presença de um microorganismo patogénico na amostra, sua quantidade será aumentada através de manipulações de laboratório bioquímico, e a bactéria pode ser facilmente detectada em um microscópio.

Análise de PCR - o que é isso?

Como é realizada a pesquisa material?

A análise requer:

  • Matriz de DNA;
  • primers que conectam as extremidades de um fragmento de material;
  • uma enzima DNA polimerase termicamente estável;
  • substâncias químicas que asseguram o bom funcionamento das enzimas;
  • uma solução tampão necessária para criar condições adequadas para o crescimento e desenvolvimento de material de DNA.

    Análise de PCR 12

Para realizar PCR, realizam-se 25-30 repetições, constituídas por três estágios: desnaturação, recozimento e alongamento.

Para a análise da reação em cadeia da polimeraseuse um dispositivo especial - um amplificador. O equipamento moderno permite configurar o programa necessário para o aquecimento e resfriamento dos tubos para eliminar erros durante o diagnóstico.

Onde é utilizado o diagnóstico?

O método da reação em cadeia da polimerase é usado em vários campos da medicina:

  • Os cientistas forenses usam isso para identificar material genético, como cabelo, saliva ou sangue;
  • A análise de sangue de PCR ajuda na genotipagem, por exemplo, para detectar uma reação individualmente manipulada por genética a um medicamento específico;
  • com a ajuda de tal método, estabelece a existência de laços familiares entre as pessoas;
  • o método de PCR mais popular tornou-se no diagnóstico médico para a definição de várias doenças infecciosas.

Quais infecções revelam PCR?

Assim, o medicamento usou há muito e com sucesso a análise da PCR. O que é, nós já aprendemos. E quais patógenos podem ser detectados com ele? As seguintes doenças infecciosas são diagnosticadas por PCR:

  • hepatite A, B, C;
  • ureaplasmose;
  • Candidíase;
  • clamídia;
  • micoplasmose;
  • gardnerellez;
  • mononucleose infecciosa;
  • tricomoníase;
  • infecção por papilomavírus;
  • tuberculose;
  • infecção por herpes do 1º e 2º tipos;
  • Helicobacteriose;
  • citomegalovírus;
  • difteria;
  • salmonelose;
  • Infecção por HIV.

    Análise de PCR para HIV

Além disso, os métodos de PCR são utilizados no diagnóstico de câncer.

Vantagens

Diagnóstico O PCR tem várias vantagens:

  1. Alta sensibilidade. Mesmo com apenas algumas moléculas de DNA do microorganismo, a análise de PCR determina a presença de infecção. O método ajudará nas doenças crônicas e latentes. Muitas vezes, em tais casos, o microorganismo não é cultivado de outras maneiras.
  2. Para o estudo, qualquer material, como saliva, sangue, sexo, cabelo, células epiteliais, é adequado. O mais comum é um exame de sangue e um esfregaço urogenital na PCR.

    PCR: faça o teste

  3. Não requer cultivo a longo prazo. O processo de diagnóstico automatizado permite que você obtenha os resultados do estudo após 4 a 5 horas.
  4. O método é quase 100% confiável. Somente casos isolados de falso negativo foram registrados.
  5. A capacidade de identificar vários tiposPatógenos de uma única amostra de material. Isso não só acelera o processo de diagnóstico da doença, mas também reduz significativamente os custos de material. Muitas vezes, o médico prescreve uma análise de PCR abrangente. O preço do exame, que consiste na definição de seis agentes patogênicos, é de cerca de 1500 rublos.

Recomendações para a preparação da análise

Para que os resultados sejam confiáveis ​​no estudo de PCR, a análise deve ser feita seguindo as recomendações para a preparação preliminar para o diagnóstico:

  1. Antes de desistir da saliva, você deve abster-se de tomar alimentos e medicação 4 horas antes de levar o material. Imediatamente antes do procedimento, enxágue a boca com água fervida.
  2. As regras acima deve ser guiada e quando se toma a amostra a partir do interior da bochecha. Após a lavagem é recomendada a realização de uma leve massagem na pele para liberar secreções prostáticas.
  3. A urina é geralmente colhida em casa. Para fazer isso, você precisa conduzir um banheiro completo dos genitais. É necessário coletar 50-60 ml de urina em um recipiente plástico estéril. Para garantir a pureza do material, recomenda-se que as mulheres insiram um tampão na vagina, e os homens puxem a dobra da pele o máximo possível. Você não pode levar o material durante o fluxo menstrual.
  4. Para esperma você precisa se abster de sexoAgir por 3 dias antes da coleta. Além disso, os médicos aconselham se recusar a visitar a sauna e tomar um banho quente, beber álcool e comida picante. 3 horas antes do teste, você precisa abster-se de urinar.
  5. Para a entrega de esfregaço urogenital, por exemplo, seuma análise é realizada na PCR de clamídia, tanto mulheres quanto homens são recomendados repouso sexual por 3 dias. 2 semanas antes do teste, os medicamentos antibacterianos não devem ser tomados. Por uma semana você precisa parar de usar géis íntimos, pomadas, supositórios vaginais, seringas. 3 horas antes do teste, você precisa abster-se de urinar. Durante a menstruação, a coleta de material não é realizada, somente após 3 dias após a cessação da descarga sanguínea pode-se fazer um esfregaço urogenital.

PCR durante a gravidez

No período de expectativa do bebê muitos infecciososAs doenças sexualmente transmissíveis são extremamente perigosas para o desenvolvimento normal do feto. DSTs podem provocar retardo de crescimento intra-uterino, aborto espontâneo ou parto prematuro, malformações congênitas da criança. Portanto, é extremamente importante passar por um teste de PCR precoce. É necessário submeter a análise no registro - até 12 semanas.

Análise em PCR de clamídia

Material de vedação origina-se do canal cervicalcom a ajuda de um pincel especial. O procedimento é indolor e não representa um perigo para o bebê. Geralmente durante a gravidez, a clamídia é analisada pelo método de PCR, bem como por ureaplasmosis, micoplasmose, citomegalovírus, herpes e papilomavírus. Tal complexo de exames é chamado de PCR-6.

PCR para diagnóstico do HIV

Em conexão com o fato de que o método de reação em cadeia da polimerasea reação é muito sensível a mudanças no corpo e às condições do diagnóstico, muitos fatores podem afetar o resultado. Portanto, a análise de PCR para a infecção pelo HIV não é um método confiável, sua eficácia é de 96-98%. Nos restantes 2-4% dos casos, o teste dá resultados falso-positivos.

Mas em algumas situações, sem diagnóstico de PCR do HIVnão administrar. Geralmente é administrado a pessoas com um resultado ELISA falso-negativo. Tais indicadores indicam que a pessoa ainda não desenvolveu anticorpos para o vírus e eles não podem ser detectados sem um aumento múltiplo no número. Isto pode ser conseguido através da realização de um teste de sangue usando um método de PCR.

Além disso, este diagnóstico é necessário para as crianças do primeiro ano de vida que nascem de uma mãe seropositiva. O método é a única maneira de determinar com segurança o status de uma criança.

PCR para diagnóstico de hepatite

O método de reação em cadeia da polimerase permiteDetectar DNA do vírus da hepatite A, B, C muito antes da formação de anticorpos contra a infecção ou o aparecimento de sintomas da doença. Particularmente eficaz é a análise de PCR para hepatite C, uma vez que em 85% dos casos uma doença deste tipo procede de forma assintomática e sem tratamento atempado passa para uma fase crônica.

Teste de sangue por PCR

A detecção atempada do agente patogênico ajudará a evitar complicações e tratamento prolongado.

Inquérito abrangente sobre PCR

Análise de PCR complexa: o que é isso?Esta reacção teste método polimezarnoy cadeia que inclui determinar simultaneamente várias espécies de infecção: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, citomegalovírus, urealitikum urealyticum, 1 e 2 do herpes tipo, gonorreia papilomavírus. O preço de tais diagnósticos varia de 2000 a 3500 rublos. dependendo da clínica, materiais e equipamentos, bem como com o tipo de análise: qualitativa ou quantitativa. O que é necessário no seu caso - o médico decidirá. Em alguns casos, você simplesmente detectar a presença do patógeno em outros, como o HIV, o importante papel desempenhado pelo título quantitativa. referida como "análise de PCR de 12" para o diagnóstico de todo o exame patógenos acima.

Explicação dos resultados da análise

A decodificação da análise de PCR não é difícil.Existem apenas 2 escalas do indicador - "resultado positivo" e "resultado negativo". Se um patógeno é detectado, os médicos podem confirmar a presença da doença com 99% de confiança e prosseguir com o tratamento do paciente. No método quantitativo de determinação da infecção na coluna correspondente, o valor numérico das bactérias detectadas será indicado. Apenas um médico pode determinar o grau da doença e prescrever o tratamento necessário.

Onde passar a análise de PCR?

Em alguns casos, por exemplo, ao determinarInfecção pelo HIV pelo método de PCR, com um resultado negativo, torna-se necessário realizar exames adicionais para confirmar os resultados.

Onde levar a análise?

Onde submeter a análise de PCR:no estado policlínico ou em um laboratório particular? Infelizmente, nas instituições médicas municipais, os equipamentos e métodos são frequentemente desatualizados. Portanto, é melhor dar preferência a laboratórios privados com equipamentos modernos e pessoal altamente qualificado. Além disso, em uma clínica particular, você obterá resultados muito mais rápidos.

Em Moscou, muitos laboratórios privados oferecemrealização de análise de PCR em várias infecções. Por exemplo, em clínicas como Vita, Complex Clinic, Happy Family e Uro-Pro, a análise de PCR é realizada. O preço do exame é de 200 rublos. para a definição de um patógeno.

Pode-se concluir que o diagnóstico de infecção infecciosaA PCR, na maioria dos casos, é uma maneira rápida e confiável de detectar o patógeno no organismo nos estágios iniciais da infecção. Mas em certos casos vale a pena escolher outros métodos do diagnóstico. A necessidade de realizar tal estudo só pode ser determinada por um especialista. Decodificar a análise de PCR também requer uma abordagem profissional. Siga as recomendações do médico e não faça testes, que não são necessários.

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